斯坦利思丨A级无菌区清洁消毒要求及注意点

A级定义：

高风险操作的关键区域（例如无菌加工线、灌装区、加塞区、开放式初级包装或在首过空气保护下进行无菌连接）。通常，此类条件由局部气流保护提供，例如 RABS（限制进入屏障系统）或隔离器内的单向气流工作站。

应适当定义和控制去污方法（清洁和生物去污，以及适用的生物材料灭活）。生物净化步骤之前的清洁过程是必不可少的；残留的任何残留物都可能抑制净化过程的有效性。还应有证据证明所使用的清洁剂和生物净化剂不会对RABS或隔离器内生产的产品产生不利影响。

对于隔离器：

内部的生物净化过程应在规定的循环参数内实现自动化、验证和控制，并应包括适当形式的杀孢子剂（例如气态或汽化形式）。手套应适当伸展，手指分开，以确保与药剂接触。使用的方法（清洁和杀孢子生物净化）应使隔离器的内表面和关键区域没有活的微生物。

对于RABS：

杀孢子消毒应包括常规应用杀孢子剂，使用的方法已经过验证和证明，并能充分覆盖内表面所有区域，并确保为无菌加工提供合适的环境。

清洁：

法规要求隔离器的消毒过程需要是自动化的，但在消毒前必须对隔离器内部进行清洁。如果未能有效地进行清洁，可能会产生：

◆ 产品残留，进而提高产品交叉污染的风险；

◆ 玻璃瓶及胶塞等残留，造成表面遮挡，影响VHP效果；

◆ 液体残留，造成表面遮挡，影响VHP效果；

◆ 去除玻璃碎片、碎屑等污染，避免带入到产品中。

由于隔离器背景环境一般是C级或D级，背景环境洁净度相对“较差”，为了避免隔离器清洁过程中引入颗粒异物等污染，需要关注点如下：

● 隔离器清洁过程中隔离器防护门会打开，清洁过程中建议隔离器层流风机需要打开，减少背景区域的颗粒异物等污染物扩散到隔离器内；

● 隔离器一般都无扩展层流，在隔离器清洁过程中隔离器门会打开，隔离器手套会直接暴露在背景环境中，为了保证隔离器手套清洁的有效性，建议配置可移动式层流小车，在层流下方进行手套的清洁。

● 清洁人员穿戴的洁净服应尽量减少纤维或颗粒的脱落，应在洁净服选型确认期间评估洁净服的颗粒脱落和颗粒阻隔效率,甚至微生物阻隔效率。除了防护洁净服，还有护目镜和无菌手套都应起到防护的效果，洁净服头套和护目镜、口罩应能包住所有头发（包括面部毛发）以及皮肤，无菌手套甚至需要考虑长款的16寸以上的，防止在清洁过程中清洁人员引入的颗粒物异物等风险。

● 擦拭布应一次性使用，建议使用预浸渍擦拭布，重复清洗使用的话可能会导致交叉污染。在擦拭布选型时应关注擦拭布的材质和洁净度，湿热灭菌后不能有颗粒脱落和纤维脱落。

消毒（生物去污）：

隔离器一般是通过VHP的方式进行生物去污，但VHP不被视为一个灭菌工艺过程，是通过“气态”过氧化氢与表面接触达到消毒的效果，与表面的清洁程度及过氧化氢浓度相关，没有像“蒸汽”一样的渗透能力，只能达到表面的消毒作用。

因VHP只能达到表面消毒作用，没有“蒸汽“一样的穿透表面能力，因此隔离器内的物品能辐照灭菌或湿热灭菌的，应灭菌后放置隔离器内进行生物净化去污，例如隔离器内使用到的不锈钢器具部件（胶塞锅、剪刀、镊子等）会用Tyvek呼吸袋包装经湿热灭菌后传入隔离器内进行生物去污，培养皿及预浸渍布等会通过辐照灭菌后对表面擦拭清洁后传入隔离器内进行生物去污。

隔离器生物去污前，应确认装载物品灭菌已完成并在有效期内、表面已消毒除尘、包装完好、挂载摆放准确且与验证时一致，物品间摆放时应保留足够间隙，应尽量减少接触面，可以悬挂的应避免平放，隔离器手套应用手套架支撑，确保充分扩展不得有褶皱。

用于无菌处理的RABS的背景环境应至少对应于B级，因背景环境洁净级别较高，清洁过程引入的污染风险较低，且一般都是由人工进行消毒去污，因此对于RABS来说应更多关注消毒过程的有效性。

RABS内一般推荐无菌型乙醇/异丙醇或无菌注射用水作为清洁剂，符合A级区域要求的干抹布擦拭吸收液体污染物，在保证表面干燥后，应用无菌消毒剂或杀孢子剂湿润表面。清洁消毒期间，应注意均流膜或高效过滤器不应被弄湿，以防止可能引起的微生物繁殖以及高效过滤器的破坏，从而导致过滤系统的完整性受损。

消毒剂和杀孢子剂溶液中会携带耐药微生物，因此使用的消毒剂和杀孢子剂使用前，去除微生物负载对于防止污染转移是至关重要的。RABS内使用的消毒剂或杀孢子剂必须是无菌的，喷瓶装醇类消毒剂建议使用防倒吸设计。杀孢子剂应作为RABS内表面常规消毒剂使用，使用杀孢子剂后则需要使用70%异丙醇擦拭去残留。 

RABS手套应定期进行湿热灭菌，为了保证灭菌效果，在设计灭菌装载时，手套应由手套支架支撑确保灭菌效果。在每次生产之前通过经过验证的方法进行消毒。如果在操作期间暴露于背景环境，则应在每次暴露后使用经批准的方法进行消毒。手套应在每次使用时进行目视检查，并应定期进行完整性测试。

RABS内表面一般均由人工进行消毒，为确保消毒效果，应有详细具体的清洁消毒方法且应被证明方法的有效性，方法中还应考虑异常情形的消毒方法，例如RABS门打开手套暴露后的消毒，设备星轮等模具需要拆卸调整后的消毒方法等。